Białka rekombinowane 2600-IG-BRBIOL-3-S1
Wiedza teoretyczna
1. Wprowadzenie do podstawowych problemów i technik inżynierii genetycznej
2. Projektowania oraz wytwarzania białek o zmodyfikowanej strukturze i/lub funkcji
3. Wykorzystanie prokariotycznych oraz eukariotycznych systemów ekspresyjnych do syntezy białek
4. Najczęściej spotykane problemy i ich możliwe rozwiązania w eksperymentach nadekspresji białek w komórkach E.coli; procesy fałdowania i agregacji białek w komórce,
5. Systemy wydzielania białek,
6. Metody wprowadzania mutacji i tworzenia białek fuzyjnych,
7. Przykłady wykorzystania białek fuzyjnych w medycynie i przemyśle
Ćwiczenia laboratoryjne
Przygotowanie plazmidu pGEX-6P-2 do klonowania – trawienie wektora enzymem restrykcyjnym XhoI, elektroforeza preparatywna zlinearyzowanego i defosforylowanego końcuów plazmidu
Przygotowanie insertu PnCDPK do klonowania – Trawienie enzymem XhoI plazmidu pTZ57R/T niosącego wstawkę ORF genu PnCDPK1, analiza elektroforetyczna, oczyszczanie otrzymanej wstawki, spektrofotometryczne określenie ilości
Ligacja wektora pGEX-6P-2/XhoI z fragmentem PnCDPK/XhoI, transformacja komórek kompetentnych E. coli linii BL21 wektorem pGEX-PnCDPK1
Ekspresja rekombinowanego plazmidu pGEX-PnCDPK1 w komórkach BL21 w celu otrzymywania białka rekombinowanego i uzyskania jego naprodukcji.
Oczyszczanie białka fuzyjnego i rekombinowanego przy użyciu wybranych technik chromatograficznych.
Analiza białkowych produktów ekspresji z wektora z użyciem SDS-PAGE i Western-blott z użyciem specyficznych poloklonalnych przeciwciał anty-PnCDPK1 i anty-GST
Całkowity nakład pracy studenta
Efekty uczenia się - wiedza
Efekty uczenia się - umiejętności
Efekty uczenia się - kompetencje społeczne
Metody dydaktyczne
Metody dydaktyczne podające
Metody dydaktyczne poszukujące
Rodzaj przedmiotu
Wymagania wstępne
Koordynatorzy przedmiotu
Kryteria oceniania
Metody oceniania
Ćwiczenia – ocena sumująca wiedzę oraz ocena raportu końcowego – K_W 03, 05, 12, 15, 23; K_U 02, 03, 07, 08, 12, 13, 14 19
Ocena bieżąca aktywności na zajęciach – umiejętności K_U 02, 03, 07, 08, 12, 13, 14 19; aktywność K_K 04, 06, 11
Kryteria oceniania
zaliczenie ćwiczeń laboratoryjnych: pisemne opracowanie obejmujące tematykę realizowaną na zajęciach (70%), ocena ciągła (bieżące przygotowanie studentów do zajęć i opracowania (20%), aktywność na zajęciach (10%); wymagany próg na ocenę dostateczną - 55-60%, dostateczny plus - 61-70%, dobry - 71-80%, dobry plus 81-90%, bardzo dobry - 91-100% .
Praktyki zawodowe
-
Literatura
Literatura podstawowa:
Ratledge C., Kristiansen B., 2011. Podstawy biotechnologii. Wydawnictwo Naukowe PWN.
Turner P.C., McLennan A.G., Bates A.D., White M.R.H., 2007. Krótkie wykłady. Biologia molekularna. Wydanie drugie. Wydawnictwo Naukowe PWN.
Staroń A., Grabowska A., Jagusztyn-Krynicka E. K., 2008. Nadprodukcja i oczyszczanie rekombinowanych, heterologicznych białek w komórkach Escherichia coli. Postępy Mikrobiologii 47 (2): 83-95.
Nuc P., Nuc K., 2006. Produkcja rekombinowanych białek w Escherichia coli. Postępy Biochemii 52 (4) 448-456.
Literatura uzupełniająca:
Gerd Gellissen (Ed.), 2005 Production of Recombinant Proteins, WILEY-VCh Verlag GmbH & Co. KGaA
http://www.molecularfarming.com/
http://www.e-biotechnologia.pl/Artykuly/Bialka-rekombinowane/
Literatura dostępna w Bibliotece UMK oraz bibliotece Katedry Fizjologii Roślin i Biotechnologii
Więcej informacji
Dodatkowe informacje (np. o kalendarzu rejestracji, prowadzących zajęcia, lokalizacji i terminach zajęć) mogą być dostępne w serwisie USOSweb: